懸浮細胞的傳代
懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代稍微簡單一些。由于細胞已經(jīng)在生長培養(yǎng)基中的懸浮，因此無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個過程較為迅速，對細胞的損傷也較小。懸浮培養(yǎng)時不進行生長培養(yǎng)基的更換；而是每2到3天加料一次，直到細胞匯合。可以直接在培養(yǎng)瓶中稀釋細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)擴增，或者也可以從培養(yǎng)瓶中取出一部分細胞，將余下的細胞稀釋到該細胞系適宜的接種密度。懸浮細胞的傳代后的延滯期一般比貼壁細胞要短。
懸浮細胞培養(yǎng)容器
懸浮培養(yǎng)可采用未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的無菌培養(yǎng)瓶（例如：不嗲折流板的搖瓶）進行；但是，專為懸浮細胞培養(yǎng)設(shè)計的轉(zhuǎn)瓶（攪拌瓶）具有出色的氣體交換功能，可進行較大規(guī)模的細胞培養(yǎng)。
轉(zhuǎn)瓶有兩種基本設(shè)計；其培養(yǎng)基由懸掛的攪拌棒或者垂直的葉輪攪拌（即攪動）。垂直葉輪的換氣效果更佳。轉(zhuǎn)瓶總培養(yǎng)體積不能超過轉(zhuǎn)瓶標示體積的一半，以便換氣充分（例如：500ml轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)液體不能超過250ml）。
所需材料
懸浮細胞傳代流程
所有與細胞接觸的溶液和設(shè)備均應(yīng)為無菌狀態(tài)。必須采用正確的無菌技術(shù)，并且在層流通風櫥內(nèi)進行。傳代應(yīng)在細胞處于對數(shù)期、未達到匯合狀態(tài)時進行。達到匯合狀態(tài)時，懸浮培養(yǎng)的細胞會聚集成團塊，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶時培養(yǎng)基會變得渾濁。傳代前所建議的大細胞密度隨細胞系不同而有所差異。
使用搖瓶進行細胞培養(yǎng)時
以下實驗方案介紹了利用振蕩培養(yǎng)箱和搖瓶進行哺乳動物細胞懸浮培養(yǎng)時傳代的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體的產(chǎn)品說明書。
注：應(yīng)確保搖瓶中無折流板（即：位于培養(yǎng)瓶底部用于攪動的齒形板），因為折流板會破壞搖動節(jié)奏。
注：為了盡量減少細胞碎片和無用的代謝副產(chǎn)物在振蕩培養(yǎng)體系中蓄積，每三周（或者必要時）應(yīng)將細胞懸液輕輕離心一次，離心力為100×g，時間為5-10分鐘，然后用新鮮的生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀。
使用轉(zhuǎn)瓶進行細胞培養(yǎng)時
以下實驗方案介紹了利用轉(zhuǎn)瓶進行哺乳動物細胞懸浮培養(yǎng)時傳代的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體的產(chǎn)品說明書。
請注意細胞對物理剪切作用很敏感。應(yīng)確保葉輪可自由轉(zhuǎn)動，不會觸碰到容器壁或底部。葉片頂部應(yīng)稍微高于培養(yǎng)基。以確保培養(yǎng)系統(tǒng)換氣充分。調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)動裝置，使葉片不會觸碰容器和底部。下表列出了不同尺寸轉(zhuǎn)瓶所需的小培養(yǎng)基體積。
我們建議開始旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時轉(zhuǎn)瓶容器不要超過500ml。建議從方法成熟、體積較小的轉(zhuǎn)瓶開始逐步擴大培養(yǎng)規(guī)模。
注：為了盡量減少細胞碎片和無用的代謝副產(chǎn)物在振蕩培養(yǎng)體系中蓄積，每三周（或者必要時）應(yīng)將細胞懸液輕輕離心一次，離心力為100×g，時間為5-10分鐘，然后用新鮮的生長培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀。
懸浮昆蟲細胞傳代的注意事項
雖然昆蟲細胞傳代的一般步驟與哺乳動物細胞相同，但是這些培養(yǎng)系統(tǒng)的一些關(guān)鍵要求有所不同。為了獲得滿意結(jié)果，實驗中必須嚴格遵守所用昆蟲細胞系附帶的操作說明。
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